{"id":928,"date":"2022-09-28T16:21:50","date_gmt":"2022-09-28T16:21:50","guid":{"rendered":"https:\/\/www.colegiojurista.com\/blog\/?p=928"},"modified":"2022-09-28T16:21:51","modified_gmt":"2022-09-28T16:21:51","slug":"proceso-para-la-identificacion-humana-mediante-adn","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/colegiojurista.com\/blog\/art\/proceso-para-la-identificacion-humana-mediante-adn\/","title":{"rendered":"Proceso para la identificaci\u00f3n humana mediante ADN"},"content":{"rendered":"

Por: Gerardo Jair Jaime Gonz\u00e1lez<\/p>\n

Lo primero que debemos de tomar en consideraci\u00f3n para realizar el procedimiento pertinente de identificaci\u00f3n humana mediante ADN, es la verificaci\u00f3n del levantamiento, empaque y\/o embalaje, as\u00ed como las condiciones de traslado de la muestra; esto para descartar que la muestra se haya contaminado, alterado o destruido y, por ello, se haya degradado el material gen\u00e9tico, recordando que \u00e9ste se puede encontrar en sangre, saliva, semen, tejido blando, tejido \u00f3sea, manchas o c\u00e9lulas epiteliales.<\/p>\n

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Despu\u00e9s de dicha verificaci\u00f3n se procede a realizar la extracci\u00f3n, la cual es el proceso de separar el ADN del resto de los componentes internos de la c\u00e9lula; en virtud de que el ADN no se encuentra totalmente s\u00f3lo en el n\u00facleo de las c\u00e9lulas, se aplica una lisis diferencial de tipo i\u00f3nico; esto es adicionar detergente, con el objetivo de ir lisando la pared celular y diferencial de centrifugaci\u00f3n; este proceso se le conoce como \u201clavado\u201d, el cual se va repitiendo para seguir degradando de manera diferencial i\u00f3nica y centrifugaci\u00f3n, hasta llegar al n\u00facleo y despu\u00e9s ir degradando las prote\u00ednas provenientes del n\u00facleo, hasta obtener el ADN de alto peso molecular y pureza, para no afectar el proceso de PCR (Reacci\u00f3n en cadena de polimerasa). Para comprobar la pureza, se realiza un lavado con una soluci\u00f3n de cloroformo impregnado con fenol, para eliminar alg\u00fan resto de prote\u00ednas, se mezcla perfectamente en un mezclador tipo vortex y se separa la fase acuosa, de la org\u00e1nica por medio de centrifugaci\u00f3n. Se adiciona un volumen igual al de la fase acuosa, (que es la \u00fatil pues es ah\u00ed donde se encuentra disuelto el ADN) de etanol absoluto fr\u00edo el cual precipita al ADN. El etanol lo desplaza, ya que este es m\u00e1s soluble en agua que el ADN.<\/p>\n

Acto seguido, se procede a cualificar y cuantificar a trav\u00e9s de electroforesis horizontal, que consiste en preparar una gelatina de un grosor de 0.6 cm y con una superficie de 14 cm de largo por 11 cm de ancho. Esta gelatina se prepara con agarosa grado prote\u00ednas, con una concentraci\u00f3n que va del 0.8% al 1.0%, esta concentraci\u00f3n permite desplazar el ADN, a trav\u00e9s de los sitios activos de la agarosa. El desplazamiento debe ser \u00fanicamente de 1.5 cm, a partir del origen, pues si rebasa esa medida no se puede cualificar si es o no de alto peso molecular, puesto que se lleva a cabo un barrido en el que no se observa una sola banda. Una banda bien definida a esa distancia, aseguran un ADN, de alto peso molecular.<\/p>\n

Para cuantificar el ADN en la muestra, se puede proceder de dos formas: la primera se efect\u00faa preparando gel de agarosa, en donde se colocan est\u00e1ndares de peso molecular conocido de 50, 100, 250 y 300 ng (nanogramos por cada 10 microlitros uL) y de acuerdo con la intensidad de la banda, se extrapolan con las bandas obtenidas de la muestra problema, determinando as\u00ed la concentraci\u00f3n del material gen\u00e9tico. La segunda forma, se realiza mediante espectroscop\u00eda de luz ultravioleta. Las absorbencias que lo caracterizan son de 260 y 280, para determinar la pureza y la concentraci\u00f3n del material gen\u00e9tico.<\/p>\n

Despu\u00e9s de cuantificar, se toman en promedio de 2 a 8 nanogramos de ADN para llevar a cabo la PCR, la cual es un tipo de clonaci\u00f3n, ya que se generan copias exactas de un fragmento especifico, de alg\u00fan oligonucle\u00f3tido del genoma humano y de naturaleza polim\u00f3rfica, esto es que tiene un alto \u00edndice de variabilidad y puede diferenciar a individuos muy parecidos. La PCR tiene en promedio 30 ciclos y cada ciclo se obtiene a diferente temperatura. Estas temperaturas dependen de los \u201cprimers\u201d o cebadores; \u00e9stas se refieren a una secuencia de oligonucle\u00f3tidos espec\u00edfica, que son, el o los moldes que generan el fragmento que se quiere amplificar.<\/p>\n

La primera temperatura utilizada es de 90\u00b0C, donde la doble h\u00e9lice de ADN se separa en dos hebras de ADN; rompi\u00e9ndose los enlaces de hidr\u00f3geno generando dos cadenas de ADN. La segunda temperatura es de 60\u00b0C, momento en que los \u201cprimers\u201d o cebadores, se pegan a cada fragmento de ADN y la \u00faltima temperatura, se eleva a 70\u00b0C, en donde la enzima Taq polimerasa, comienza a colocar, de acuerdo a la secuencia de los \u201cprimers\u201d, cada base p\u00farica y pirid\u00edmica, generando a partir de una doble h\u00e9lice, 2 h\u00e9lices de ADN; de dos se obtiene 4 y as\u00ed sucesivamente hasta complementar en promedio, 30 ciclos, los que generan millones de secuencias en cuesti\u00f3n.<\/p>\n

Al concluir los ciclos programados, el producto amplificado es sometido a una temperatura final de 72\u00b0C, por 7 minutos, con la finalidad, de asegurar la uni\u00f3n de las cadenas de ADN formadas. Los factores que pueden afectar la amplificaci\u00f3n son: la pureza del ADN, la concentraci\u00f3n de \u00e9ste y la temperatura de amplificaci\u00f3n.<\/p>\n

Por \u00faltimo, al concluir la Reacci\u00f3n en Cadena de la Polimerasa, se elabora un gel de agarosa grado PCR al 4% dependiendo de la muestra y para verificar la presencia de \u00e9sta, deber\u00e1 aplicarse al gel, la llamada \u201cescalera de peso molecular\u201d, para determinar con precisi\u00f3n los productos de PCR. Una vez hecho lo anterior se determinar\u00e1 el genotipo de la muestra, lo que puede lograrse utilizando cualquiera de los siguientes procedimientos: el primero es por medio de tiras Dolt-Blot, y el segundo consiste en efectuar electrof\u00f3resis vertical. Esta t\u00e9cnica es m\u00e1s sensible que la anterior.<\/p>\n

Cabe mencionar que este procedimiento es s\u00f3lo uno de los que se puede aplicar en los diferentes laboratorios de gen\u00e9tica forense instalados en las Fiscal\u00edas y\/o Procuradur\u00edas de los estados y de la Federaci\u00f3n.<\/p>\n

Bibliograf\u00eda:<\/p>\n